Autoantikörperformation und Kartierung von immunogenen Epitopen gegen das Kälteschockprotein YB-1 in Tumorpatienten und gesunden Kontrollprobanden

Abstract

Das Kälteschock Y-box binding Protein 1 partizipiert in der Tumorzelltransformation und vermittelt invasives Zellwachstum. Es ist unbekannt ob sich eine Autoimmunantwort gegen tumorös verändertes humanes YB-1 mit posttranslationalen Proteinmodifikationen oder Prozessierungen entwickelt. Es wurde eine systematische Analyse bezüglich einer Autoantikörperformation gegen Konformations- sowie lineare Epitope des Proteins durchgeführt. Rekombinante Volllängen- und gekürzte Proteine aus prokaryoten und eukaryoten Zellen wurden generiert. Die Charakterisierung offenbarte eine spontane Proteinspaltung, vornehmlich im prokaryoten Protein. Autoantikörper gegen prokaryotes, aber nicht eukaryotes YB-1 Protein wurden sowohl in den gesunden Kontrollprobanden als auch Tumorpatienten detektiert. Eine Kartierung von immunogenen Konformationsepitopen wurde mit gekürzten aus prokaryoten abgeleiteten humanen GST-YB-1 Proteinen durchgeführt und lieferte verschiedene Residuen im N- und C-terminalen Proteinabschnitt. Die Verwendung eines Peptid-Arrays, mit sich konsekutiv überlappenden Oligopeptiden mit jeweils 15 Aminosäuren Länge, zeigte 6 unterschiedliche antigene Regionen in Tumorpatienten, jedoch mit geringerem Ausmaß in den Kontrollprobanden. Schließlich wurde ein Proteinspaltungsansatz mit rekombinantem pro- und eukaryotem humanen YB-1 Protein durchgeführt. Es entstand ein unterschiedliches Spaltungsmuster, das sich verzögert mit den Seren von Tumorpatienten zeigte. Zusammenfassend entwickelt sich eine spezifische Autoimmunantwort gegen humanes YB-1 Protein in Tumoropatienten mit Autoantikörper, die gegen lineare - und Konformationsepitope gerichtet sind.