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http://dx.doi.org/10.25673/32868
Full metadata record
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.referee | Schmitz, Ingo | - |
dc.contributor.author | Fraust, Beate | - |
dc.date.accessioned | 2020-03-30T11:59:50Z | - |
dc.date.available | 2020-03-30T11:59:50Z | - |
dc.date.issued | 2020 | - |
dc.date.submitted | 2019 | - |
dc.identifier.uri | https://opendata.uni-halle.de//handle/1981185920/33059 | - |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.25673/32868 | - |
dc.description.abstract | The immune system recognizes and eliminates infiltrating microorganisms and other pathogens like viruses and parasites. Beside monocytes, macrophages and B-lymphocytes, dendritic cells (DC) belong to the antigen-presenting cells (APC) and serve as point of intersection between the innate and adaptive immune system. DC recognition of pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and danger-associated molecular patterns (DAMPs) by specific PAMP recognition receptors (PRRs) leads to their maturation and an upregulation of different molecules, e.g. the inflammatory cytokine IL-1β and the anti-apoptotic molecule cFLIP (cellular-FLICE inhibitory protein). The aim of this thesis was the detailed characterisation of the respective inflammatory and apoptotic signalling pathways in murine DCs also by interference via either dominant-negative protein expression or siRNA-mediated knockdown and the analysis of their impact on T cell priming. Beside DC-maturation, lipopolysaccharide, lipoteichonic acid, hyaluronic acid or a cocktail containing TNF-α, IL-4, CD40L and PGE2 together led to an activation of the inflammasome. The mRNA expression of IL-18, IL-33 and IL-1β and the protein expression of the inflammatory caspase-11 increased and IL-18 and IL-1β were secreted. The IL-1β secretion could be further increased by supplemental stimulation with the DAMP ATP, was dependent on caspase-activation as well as potassium gradient and regulated via the P2X7 receptor. DC inflammasome activation did not influence the CD4+ TC proliferation rate, but showed a complex spectrum of induced cytokines, namely TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10, GM-CSF, IL-6, IL-5, M-CSF and IL-17 arguing for a complex immune response dependent on the infection background. Expression of a dominant-negative variant of the adapter molecule ASC (dnASC) to block the inflammasome-mediated signalling cascade led to a massive DC death, and did not allow conclusions about the role of inflammatory caspases and their intracellular network in respect to the inflammatory cytokines. DC maturation-induced upregulation of cFLIP inhibited CD95L-induced apoptosis by blocking caspase-8 at the death inducing signalling complex (DISC). A complete genetic knockout of cFLIP in DCs led to a severe spontaneous cell death rescued by expression of one cFLIP-allele. A knockdown of cFLIP also directly diminished DC lifespan, but had no specific influence on TC proliferation rate and DC survival during DC-TC interaction. These findings provide new insights in the fundamental roles of ASC and cFLIP for the lifespan of DCs and may help to further develop the DC-based immunotherapy. | eng |
dc.description.abstract | Das Immunsystem erkennt und eliminiert eindringende Mikroorganismen und andere Pathogene wie Viren und Parasiten. Dendritische Zellen (DZ) zählen neben Monozyten, Makrophagen und B-Lymphozyten zu den professionellen Antigen-präsentierenden Zellen (APC) und fungieren als Schnittstelle zwischen dem angeborenen und dem erworbenen Immunsystem. Das Erkennen fremder molekularer Muster unterschiedlicher Pathogene (pathogen-associated molecular patterns, PAMPs) und eigener Gefahr-assoziierter Muster (danger-associated molecular patterns, DAMPs) über spezifische Rezeptoren (PAMP recognition receptors (PRRs)) führt bei DZ zur Reifung und einer Hochregulation verschiedener Moleküle, wie z.B. dem inflammatorischen Zytokin IL-1β und dem anti-apoptotischen cFLIP (cellular-FLICE inhibitory protein). Das Ziel der Dissertation ist die detaillierte Charakterisierung der zugehörigen inflammatorischen und apototischen Signalwege in murinen DZ, des Weiteren auch durch Interferenz mittels dominant-negativer Proteinexpression bzw. siRNA-vermitteltem Knockdown und deren Auswirkungen auf das T-Zell-Priming. Neben einer DZ-Reifung führen Lipopolysaccharid, Lipoteichonsäure, Hyaluronsäure oder ein Cocktail aus TNF-α, IL-4, CD40L und PGE2 zur Aktivierung des Inflammasoms. Dies führt zu einer gesteigerten Genexpression von IL-18, IL-33 und IL-1β und erhöhter Proteinexpression der inflammatorischen Caspase-11 und zur Freisetzung von IL-18 und IL-1β. Die IL-1β Freisetzung konnte über eine zusätzliche Stimulation mit dem DAMP ATP erhöht werden, war abhängig von der Caspase-Aktivität und einem Kaliumgradienten, und über den P2X7 Rezeptor reguliert. Die Aktivierung des Inflammasoms in DZ hatte keinen Einfluss auf die CD4+ T-Zell-Proliferationsrate, zeigte aber ein komplexes Spektrum induzierter Zytokine, wie TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10, GM-CSF, IL-6, IL-5, M-CSF und IL-17, welches für eine komplexe Immunantwort in Abhängigkeit vom Infektionshintergrund spricht. Die Expression einer dominant-negativen Form des Adaptermoleküls ASC (dnASC), welche den inflammatorischen Signalweg blockieren sollte, führte zu einem massiven DZ-Sterben und ließ keine Rückschlüsse über die Rolle der inflammatorischen Caspasen und ihr intrazelluläres Netzwerk im Hinblick auf die inflammatorischen Zytokine zu. Die durch DZ-Reifung induzierte Hochregulation des Apoptose-Inhibitors cFLIP führt zu einer Resistenz gegenüber der CD95L-induzierten Apoptose durch die Inhibition der Caspase-8 im CD95 Rezeptorkomplex (DISC). Ein kompletter genetischer Verlust von cFLIP führte zu einem spontanen DZ-Zelltod, welcher bereits durch das Vorhandensein eines cFLIP-Allels verhindert werden konnte. Eine Verringerung der cFLIP Expression in DZ führte ebenso zu einer Verkürzung ihrer Lebensdauer, zeigte aber keinen spezifischen Einfluss auf die TZ-Proliferationsrate und das Überleben der DZ im Interaktionsmodell. | ger |
dc.format.extent | 178 Seiten | - |
dc.language.iso | eng | - |
dc.rights.uri | https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ | - |
dc.subject | Immunologie | ger |
dc.subject.ddc | 616.079 | - |
dc.title | Apoptotic and inflammatory signalling pathways in dendritic cells | eng |
dcterms.dateAccepted | 2020 | - |
dcterms.type | Hochschulschrift | - |
dc.type | PhDThesis | - |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:ma9:1-1981185920-330592 | - |
local.versionType | acceptedVersion | - |
local.publisher.universityOrInstitution | Otto-von-Guericke-Universität Magdeburg, Fakultät für Naturwissenschaften | - |
local.openaccess | true | - |
dc.identifier.ppn | 1693498359 | - |
local.publication.country | XA-DE-ST | - |
cbs.sru.importDate | 2020-03-30T11:56:11Z | - |
local.accessrights.dnb | free | - |
Appears in Collections: | Fakultät für Naturwissenschaften |
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Fraust_Beate_Dissertation_2020.pdf | Dissertation | 3.89 MB | Adobe PDF | ![]() View/Open |