Analyse der Regulation der Retikulozyten-15-Lipoxygenase-mRNA-Translation durch den 3'UTR-DICE-Komplex

Abstract

Während der Reifung roter Blutzellen zu Erythrozyten wird der Zellkern in einem frühen Stadium inaktiviert, Transkription und mRNA Synthese sind dadurch terminiert. Die Synthese bestimmter Proteine wird durch die Regulation der mRNA-Translation kontrolliert, wie die der Retikulozyten-15-Lipoxygenase (r15-LOX), welche erst im Stadium des reifen Retikulozyten, in dem das Enzym den Mitochondrienabbau initiiert, erfolgt. In frühen Stadien wird die Initiation der r15-LOX-mRNA-Translation durch den am DICE in der 3’UTR assoziierten hnRNP K/E1-Komplex, direkt am Initiationskodon inhibiert. Cytoplasmatischer K562-Zellextrakt, der den Mechanismus der Translationsregulation durch den hnRNP K/E1-DICE Komplex vollständig rekapituliert, wurde zur Isolierung und massenspektrometrischen Analyse des DICE-assoziierten regulatorischen Komplexes verwendet. Das DEAD-Box Protein DDX6 wurde als ein spezifisch interagierender Faktor identifiziert und seine Funktion in der DICE-abhängigen Translationsregulation untersucht.