Einfluss des Weichmachers Di(2-ethylhexyl)phthalat auf die Adipogenese einer humanen Präadipozytenlinie

Abstract

Der Weichmacher Di(2-ethylhexyl)phthalat (DEHP) steht unter Verdacht, obesogen auf den Menschen zu wirken. Ziel der Studie ist es, das obesogene Potenzial von DEHP in humaner Zellkultur zu untersuchen. Zellen der humanen Präadipozytenlinie Simpson-Golabi-Behmel-Syndrom (SGBS) wurden über 14 Tage zu reifen Adipozyten differenziert und während der Induktionsphase mit DEHP in umweltrelevanter Konzentration von 50 μg/ml exponiert. Die Hydrolyse von DEHP zu Mono(2-ethylhexyl)phthalat (MEHP) wurde mit HPLC-Massenspektrometrie nachgewiesen, die Dysregulation der Adiponektinsignalkaskade mit qRT-PCR, Western-Blot und ELISA analysiert, die Frage einer DEHP-induzierten Hypertrophie oder Hyperplasie mit FACS beantwortet und die intrazelluläre Lage von Perilipin und GLUT4 mit Immunfluoreszenz ermittelt. Die Gene Adiponektin, AMPK und ACACB waren an Tag 4 dysreguliert, die Proteinsynthese und -sekretion von LEPTIN im Gegensatz zu ADIPONEKTIN langfristig erhöht, und die Fetteinlagerung unter DEHP an Tag 8 signifikant erhöht. Diese Ergebnisse zeigen, dass DEHP ein obesogenes Potenzial auf SGBS-Zellen hat.

The plasticizer di-2-ethylhexyl phthalate (DEHP) is suspected to act as an obesogen on human beings. Aim of this study is to examine the obesogen potential of DEHP in human cell culture. Cells of the human preadipocyte cell line Simpson-Golabi-Behmel syndrome (SGBS) were differentiated to mature adipocytes for 14 days and were exposed to DEHP in an environmentally relevant concentration of 50 μg/ml. The hydrolysis of DEHP to its metabolite monoethylhexyl phthalate (MEHP) was proven by use of HPLC-mass spectrometry. The dysregulation of the adiponectin signalling cascade was analysed with qRT-PCR, Western-Blot and ELISA. The question whether DEHP induces hypertrophy or hyperplasia was answered with FACS and the intracellular locations of perilipin and GLUT4 were detected by use of immunofluorescence. QRT-PCR showed a dysregulation of adiponectin, AMPK and ACACB at day 4. ELISAs of day 14 extracellular medium revealed a long-term elevated protein synthesis and secretion of LEPTIN, but not of ADIPONECTIN. Day 8 FACS analysis resulted in a DEHP-induced elevated fat storage. These findings show that DEHP has an obesogen potential on human SGBS cells.