RBBP6 aktiviert die Spaltung von humanen Prä-mRNAs : Rekonstitution und Charakterisierung der 3‘-Prozessierung

Abstract

Die meisten 3‘-Enden von eukaryotischen mRNAs entstehen durch eine zweistufige Reaktion. Dazu wird im ersten Schritt der mRNA-Vorläufer endonukleolytisch gespalten und anschließend ein Poly(A)-Schwanz angehängt. Die für die Prä-mRNA-Spaltungsreaktion beteiligten Faktoren waren zum Teil unbekannt. In der Rekonstitution werden 14 Polypeptide benötigt, bei denen neben den bekannten Prozessierungsfaktoren mPSF, mCF, CstF, CFII und PAP, RBBP6 als essentieller Faktor identifiziert wurde. Die beiden N-terminalen Domänen DWNN und der CCHC-Zinkknöchel haben dabei erheblichen Einfluss. Dahingegen besitzt CFI lediglich eine stimulierende Funktion. Die in Vitro Reaktion ist abhängig von einem Makromolekularen crowder, welcher zusammen mit den Proteinen für eine Präzipitation der RNA, des 5‘-Spaltproduktes und der 3‘-Prozessierungsfaktoren sorgt.

Most 3'-ends of eukaryotic mRNAs are produced by a two-step reaction. In the first step, the mRNA precursor is endonucleolytically cleaved and then a poly(A) tail is attached. The factors involved in the pre-mRNA cleavage reaction were partly unknown. Reconstitution requires 14 polypeptides, of which RBBP6 was identified as an essential factor in addition to the known processing factors mPSF, mCF, CstF, CFII and PAP. The two N-terminal domains DWNN and the CCHC zinc knuckle have a considerable influence. In contrast, CFI only has a stimulating function. The in vitro reaction is dependent on a macromolecular crowder which, together with the proteins, ensures precipitation of the RNA, the 5'-cleavage product and the 3'-processing factors.