Strukturelle Untersuchungen an den extrazellulären Liganden-bindenden Domänen der Parathormon-Rezeptoren 1 und 2 sowie der L-Glutamin:Glykosyl-Paromamine-3"-Aminotransferase TobS2

Abstract

1. Strukturelle Untersuchungen an den extrazellulären Domänen der Parathormon-Rezeptoren 1 und 2: Die humanen Parathormon-Rezeptoren 1 und 2 gehören zur Klasse B der G-Protein gekoppelten Rezeptoren. In der vorliegenden Dissertation gelang es die Kristallstruktur des Liganden PTH(1-37) zu lösen. Um nun einen stabilen 1:1-Komplex zwischen Rezeptordomäne und Ligand zu erhalten wurden Fusionsproteine hergestellt. Es konnte gezeigt werden, dass diese eine korrekte Sekundärstruktur aufweisen, eine intramolekulare Bindung ausbilden und eine verbesserte thermische Stabilität zeigen. NPTHR2 konnte in E.coli exprimiert und anschließend in seiner nativen Form gereinigt werden. 2. Strukturelle Untersuchungen der L-Glutamin:Glykosyl-Paromamine-3''- Aminotransferase TobS2: TobS2 ist eine Aminotransferase aus dem Tobramycin-produzierenden Biosyntheseweg in S. tenebrarius. Unter Nutzung des Kofaktors PLP und des Aminodonors L-Glutamin (L-Gln) setzt TobS2 6-O-Glukos-Paromamin zu Kanamycin B um. In der vorliegenden Arbeit konnten Kristallstrukturen des Apo-Enzyms und von TobS2 in Gegenwart von PLP, PLP und L-Gln, sowie PLP und Tobramycin erhalten und somit der genaue Katalysemechanismus des Enzyms näher beschrieben werden.