Untersuchung der Substratspezifität der PRMTs 1, 3 und 6 und der Funktion der Arginindimethylierung

Abstract

Das nukleäre Poly(A)-Bindungsprotein 1 (PABPN1) wird von den zellulären Protein-Arginin-Methyltransferasen (PRMTs) 1, 3 und 6 an 13 Argininen seines C-Terminus asymmetrisch dimethyliert. Auch Rekombinante PRMTs konnten PABPN1 methylieren. Ein N-terminaler His-tag interferierte nicht mit der Aktivität. Eine Beteiligung weiterer Faktoren wurde ausgeschlossen. Die Substratspezifität der Enzyme wurde mit Hilfe von Peptiden und Proteinchimären aus PABPN1, dem heterogenen nukleären Ribonukleoprotein K (hnRNP K) und dem Kälteschockprotein B von Bacillus subtilis (CspB) untersucht. Die drei PRMTs erkannten unterschiedliche lokale Aminosäuresequenzen, die Methylierung konnte aber z. T. durch benachbarte gefaltete Domänen beeinträchtigt werden. Methyliertes und unmethyliertes PABPN1 wurde in Xenopus-Oozyten injiziert. Es bestand kein signifikanter Unterschied beim nukleären Import, möglicherweise weil das unmethylierte Protein nach der Injektion in die Oozyten methyliert werden konnte.