Die Auffindung neuer Bindepartner pflanzlicher Gα-Proteine durch genetische, zellbiologische und biochemische Methoden

Abstract

In Pflanzen werden mehrere Signalkaskaden durch das gleiche heterotrimere G-Protein gesteuert, wobei angenommen wird, dass es mit verschiedenen Zielproteinen interagiert. Interaktoren der Gα-Untereinheit wurden mittels des mating-based Split-Ubiquitin Systems identifiziert. Dieses detektierte in Hefezellen die Bindung mit zahlreichen Proteinen, welche von cDNA-Banken aus Arabidopsis thaliana und Eschscholzia californica exprimiert wurden. Diese Interaktoren konnten anhand ihrer Bindungsstärke, über die experimentelle Verminderung des zur Verfügung stehenden Gαs, geordnet werden. Die hochaffinen Interaktoren unterschieden sich stark in Arabidopsis und Eschscholzia. Es wurde auch mit den Gα-Proteinen beider Spezies in der gleichen cDNA-Bank von Arabidopsis gesucht. Nur 2 Proteine konnten beide Gαs mit ähnlicher Affinität binden: die Untereinheit Gβ und ein pentatricopeptide repeat-containing Protein. Es scheint, dass durch stringente Bedingungen die Detektion von Proteinen, die mit Gα Komplexe eingehen, gegenüber funktionellen Targets, die möglicherweise durch schwache Interaktionen kontrolliert werden, bevorzugt wird.