Etablierung und Charakterisierung einer polarisierten Kultur für Signaltransduktionsanalysen in primären murinen Hepatozyten

Abstract

Das Ziel dieser Arbeit bestand darin, eine Sandwichkultur für polarisierte murine Hepatozyten zu etablieren, in der molekulargenetische und proteinbiochemische Untersuchungen durchgeführt werden können. Diese Kultur und die konventionelle Monolayerkultur wurden bezüglich der Morphologie, Polarität, und Antwort auf Interleukin6 vergleichend charakterisiert. Dazu wurden zunächst neue Methoden etabliert bzw. weiterentwickelt (RNAund Proteinextraktion, Immunfärbung, Western Blot). Die Sandwichkultur zeigt auch am Tag 5 noch eine deutliche Reaktion auf der IL6Stimulation, während in der Monolayerkultur schon am Tag 3 eine konstitutive Expression aller untersuchten Proteine beobachtet wurde. Dies ging einher mit Dedifferenzierung und Polaritätsverlust. Obwohl die Sandwichkultur die Struktur und Funktion der Leber keinesfallsvollständig wiedergeben kann, konnte in der vorliegenden Arbeit eine Kultur für murine Hepatozyten etabliert werden, die auch für Untersuchungen von Signalwegen geeignet ist.