Etablierung einer Flp/FRT-vermittelten Rekombination des Selektionsmarkers und Untersuchungen zur RNAi-induzierten Resistenzerhöhung gegenüber pilzlichen Schaderregern beim Apfel (Malus x domestica BORKH.)

Abstract

Ziel war die Erzeugung transgener Apfelsprosse, die kein nptII-Gen mehr enthalten. Ein Monitoringvektor wurde für die Etablierung des Flp/FRT-Rekombinationssystems erstellt. Auf der T-DNA wurden ein 35S-Promotor und ein gusA-Gen platziert, welche durch ein FRT-flankiertes Fragment räumlich getrennt wurden. Dieses FRT-flankierte Fragment bestand aus dem nptII-Gen und dem flp-Gen, welches von einem Hitzestress-induzierbaren Promotor reguliert wurde. Eine Expression von gusA wurde somit erst nach der Entfernung des FRT-flankierten Fragments erwartet. Die Hitzestress-Behandlung bei 42°C für 4 Stunden induzierte die Flp-vermittelte Rekombinationen. Die Regeneration Hitzestress-behandelter Blätter erzeugte vollständig Markergen-freie Sprosse. In ersten Experimenten wurde eine wirtinduzierte Abwehrstrategie gegen pilzliche Pathogene an Apfel untersucht. Der Transport von siRNA aus Apfelblättern in P. leucotricha wurde gezeigt. Als potentielles Zielgen wurden pilzliche Chitinsynthase Klasse V-Gene ausgewählt und die Anwesenheit von diesen in Apfelmehltau und Apfelschorf gezeigt.