Etablierung der in vitro Renaturierung von Vitamin K Epoxid Reduktase

Abstract

In dieser Arbeit wurde ein System etabliert, mit dem Vitamin K Epoxid Reduktase (VKOR) in Form von inclusion bodies produziert und gereinigt werden konnte. Die in vitro Renaturierung und Rekonstitution des Proteins ermöglichte es, VKOR in nativer Form zu erhalten. Es konnte gezeigt werden, dass die Enzymaktivität stark durch die Lipidumgebung beeinflusst wird. Die erhaltenen Daten aus den Enzymaktivitätassays weisen auf Unterschiede des Lipidphasenzustands und des Diffusionsverhaltens als wahrscheinliche Ursachen der unterschiedlichen Aktivität hin. Die durchgeführten Flotationsexperimente sprechen gegen eine ungleichmäßige Effizienz der Rekonstitution in die verschiedenen Lipidmembranen als Grund für die differierenden VKOR-Aktivitäten. Ein Einfluss des pH-Wertes oder der Gegenwart von Redoxsystemen während der Renaturierung wurde nicht beobachtet. Daher scheinen keine strukturell wichtigen Disulfidbrücken in der Renaturierung von VKOR involviert zu sein.