Untersuchungen zu Peptidyl-Prolyl-cis/trans-Isomerasen - Interaktionen mit Zielproteinen und Inhibitoren

Abstract

Die humane Peptidyl-Prolyl-cis/trans-Isomerase Pin1 bindet spezifisch an phosphorylierte Serin-Prolin- und phosphorylierte Threonin-Prolin-Reste (pSer/Thr-Pro) und katalysiert die Prolylisomerisierung in diesen Motiven. Im Rahmen dieser Arbeit wurde das Protein DNA replication licensing factor MCM3, eine Untereinheit des „minichromosome maintenance“-Komplexes MCM2-7, als neuer Interaktionspartner von Pin1 identifiziert. Die Interaktion wird über die WW-Domäne von Pin1 vermittelt und erfordert die Phosphorylierung von Ser/Thr-Pro-Motiven in MCM3. Pin1 unterstützt in HeLa-Zellen die Ausbildung des MCM2-7-Komplexes und beeinflusst die Assemblierung von MCM3 am Chromatin in Abhängigkeit von der Zellzyklusphase. Bei der Untersuchung von neuen unterschiedlich substituierten Arylhetarylketonen und Thioketonen als Inhibitoren wurden Verbindungen mit Inhibitionskonstanten im mikromolaren und submikromolaren Bereich gegenüber Pin1 gefunden. Zudem wurde eine Methode zur Isolierung von Cyclophilinen aus humanem Serum entwickelt.

The human peptidyl prolyl cis/trans isomerase Pin1 specifically binds phosphorylated serine-proline and phosphorylated threonine-proline moieties (pSer/Thr-Pro) and catalyzes the prolyl isomerization within these motifs. In this work the DNA replication licensing factor MCM3 which is a subunit of the minichromosome maintenance protein complex MCM2-7 was identified as a new Pin1 interaction partner. The interaction is mediated by the WW domain of Pin1 and requires phosphorylation of Ser/Thr-Pro motifs within MCM3. In HeLa cells Pin1 facilitates the formation of the MCM2-7 complex and influences the binding of MCM3 to chromatin in a cell cycle dependent manner. During investigation of differently substituted new aryl hetaryl ketones and thioketones as inhibitors compounds with inhibitor constants towards Pin1 ranging in the micromolar and submicromolar range were detected. Furthermore a method to isolate cyclophilins from human serum was developed.