Peptidmikroarrays zur Charakterisierung von Bindungs- und Substratspezifitäten

Abstract

In dieser Arbeit wurden verschiedene Peptidmikroarrays als effizientes Hilfsmittel für die parallele Untersuchung einer großen Anzahl von putativen Substraten bzw. Bindern für Enzyme bzw. Proteine genutzt. Das umfangreiche Anwendungsgebiet der Peptidmikroarrays wurde dabei demonstriert. Dabei war es sowohl möglich Bindungsspezifitäten von Readerdomänen und von verschiedenen kommerziellen sequenzspezifischen Antikörpern, als auch die Substratspezifitäten von writern und erasern durch die Nutzung derselben Assay-Technologie zu bestimmen. Zusätzlich konnte der cross-talk zwischen verschiedenen posttranslationalen Modifikationen für enzymatische Aktivitäten mittels dieser Assay-Technologie ermittelt werden. Anhand ausgewählter Beispiele sollten die auf den Peptidmikroarrays gefundenen Resultate auch in homogenen Assays validiert und kinetisch charakterisiert werden.

This thesis could show the potential of peptide microarrays as efficient tool for parallel profiling of various putative substrates for enzymes as well as binders for proteins. The comprehensive range of application of peptide microarrays could be demonstrated. By means of the same assay technology this work could identify binding specificities of readers and of diverse commercially available sequence specific antibodies, as well as the characterization of substrate specificities of various writers and erasers. Additionally, the cross-talk of posttranslational modifications for enzymatic activities could be identified by means of this assay technology. For selected proteins the results of the peptide microarrays were validated in homogeneous assays and characterized kinetically.