Please use this identifier to cite or link to this item: http://dx.doi.org/10.25673/2273
Title: Identifizierung von Protein-Protein-Interaktionen und strukturelle Charakterisierung der humanen Proteinkinase D2 mittels Massenspektrometrie-basierter Methoden
Author(s): Häupl, Björn
Referee(s): Sinz, Andrea
Schwarz, Elisabeth
Marcus, Katrin
Granting Institution: Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg
Issue Date: 2018
Extent: 1 Online-Ressource (185 Seiten)
Type: Hochschulschrift
Type: PhDThesis
Exam Date: 2018-03-23
Language: German
Publisher: Universitäts- und Landesbibliothek Sachsen-Anhalt
URN: urn:nbn:de:gbv:3:4-22904
Abstract: Die Etablierung einer kombinierten analytischen Strategie aus Affinitätsanreicherung, Proteinvernetzung und Massenspektrometrie ermöglichte aus zytosolischen und Golgi-Apparat-Proteinfraktionen die Identifizierung von insgesamt 39 Protein-Interaktionspartnern der humanen Proteinkinase D2 (PKD2). Diese zeigten sowohl bereits beschriebene als auch bisher unbekannte funktionelle Zusammenhänge zur PKD2 und erlaubten Rückschlüsse auf deren Rolle am Golgi-Apparat sowie auf assoziierte Wechselwirkungen mit zytosolischen Effektorproteinen. Hervorzuheben sind dabei der Arp2/3-Proteinkomplex und der AP-2-Proteinkomplex, die an der dynamischen Assemblierung des Zytoskeletts und der Regulation des zellulären Vesikeltransportes beteiligt sind. Zudem wurden mittels Proteinvernetzung und massenspektrometrischer Analyse der Vernetzungsprodukte molekulare Distanzbeschränkungen der PKD2 identifiziert. Diese können als Grundlage der Aufklärung von Struktur-Funktionsbeziehungen mit den identifizierten Protein-Interaktionspartnern in die Erstellung bzw. Validierung von PKD2-Strukturmodellen einfließen.
A combined analytical strategy comprising affinity enrichment, protein cross-linking and mass spectrometry enabled the identification of a total of 39 protein interaction partners of human protein kinase D2 (PKD2) from cytosolic and Golgi apparatus protein fractions. The identified binding partners revealed both already described and so far unknown functional relationships with PKD2 and provided insights into the role of PKD2 at the Golgi apparatus as well as regarding associated interactions with cytosolic effector proteins. In particular, the Arp2/3 protein complex and the AP-2 protein complex were identified, which are involved into the dynamic assembly of the cytoskeleton and the regulation of cellular vesicle transport. Furthermore, using protein cross-linking and mass spectrometric analysis of cross-linking products molecular distance constraints of PKD2 were identified. These could serve for the generation and validation of PKD2 structural models regarding the elucidation of structure-function relationships with the identified protein interaction partners.
URI: https://opendata.uni-halle.de//handle/1981185920/9045
http://dx.doi.org/10.25673/2273
Open Access: Open access publication
License: In CopyrightIn Copyright
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