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dc.contributor.authorAsztalos, Peter-
dc.date.accessioned2018-09-24T13:16:39Z-
dc.date.available2018-09-24T13:16:39Z-
dc.date.issued2008-
dc.identifier.urihttps://opendata.uni-halle.de//handle/1981185920/9115-
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.25673/2330-
dc.description.abstractZiel der präsentierten Arbeit war das Verständnis der Katalyse des Vitamin B1-abhängigen Enzyms Transketolase A aus Escherichia coli auf molekularer Ebene. Hierzu wurden molekularbiologische Methoden (ortsgerichtete Mutagenesen) zur Generierung von aktiven-Zentren-Varianten sowie zur Einführung der Sequenz eines C-terminalen His6-tags genutzt. Durch den Vergleich von durch steady-state- (Aktivitätstest, Intermediatanalyse) und pre-steady-state-Messungen (stopped-flow-Absorptionsspektroskopie, Intermediatanalyse) bestimmten enzymkinetischen Parametern konnte der Einfluß einzelner Aminosäureseitenketten auf die Katalyse untersucht werden. Die Röntgenkristallographie mit Substrat-soaking-Technik erlaubte die Kristallisation der enzymgebundenen kovalenten Donorintermediate von D-Xylulose-5-phosphat und D-Fructose-6-phosphat sowie des nicht-kovalenten Akzeptorsubstrat-Enzymkomplexes von D-Ribose-5-phosphat in der docking-site der Transketolase A. Der Einsatz von Cofaktor-Analoga gestattete die Untersuchung unterschiedlicher Ausprägungen von Banden im CD-Spektrum. Zudem ließ sich eine bisher für Transketolase nicht beschriebene Acetohydroxysäure-Synthase (AHAS)-ähnliche Carboligationsreaktion zeigen.-
dc.description.abstractThe aim of the work presented here was the understanding of catalysis of the vitamin B1-dependent enzyme transketolase A from Escherichia coli on a molecular level. In this concern methods of molecular biology (site directed mutagenesis) were used to generate active-site variants as well as for the introduction of a sequence for a C-terminal His6-tag. By comparison of steady-state (activity, analysis of covalent intermediates) as well as pre-steady-state investigations (stopped-flow absorbance, analysis of covalent intermediates) the influence of active-site residues on catalysis were examined. The application of X-ray crystallography with substrate-soaking technique allowed the crystallization of the enzyme-bound covalent donor intermediates of D-xylulose 5-phosphate and D-fructose 6-phosphate as well as the non-covalent acceptor-substrate-enzyme-complex of ribose 5-phosphate in the docking site of transketolase A. Coenzyme analogues were used to analyse different positions of bands observed in the CD spectra. Furthermore, a hitherto undescribed acetohydroxyacid synthase (AHAS)-like carboligation reaction was shown for the enzyme.eng
dc.description.statementofresponsibilityvon Peter Asztalos-
dc.format.extentOnline-Ressource, Text + Image (kB)-
dc.language.isoger-
dc.publisherUniversitäts- und Landesbibliothek Sachsen-Anhalt-
dc.subjectElektronische Publikation-
dc.subjectHochschulschrift-
dc.subjectOnline-Publikation-
dc.subjectZsfassung in engl. Sprache-
dc.subject.ddc572.79229342-
dc.titleUntersuchungen zu molekularen, strukturellen und biokatalytischen Aspekten des Vitamin B1-abhängigen Enzyms Transketolase A aus Escherichia coli-
dcterms.typeHochschulschrift-
dc.typeDoctoral Thesis-
dc.identifier.urnurn:nbn:de:gbv:3-000013193-
local.publisher.universityOrInstitutionMartin-Luther-Universität Halle-Wittenberg-
local.subject.keywordsTransketolase A, Escherichia coli, kovalente Intermediate, ThDP (Thiamindiphosphat), near attack-Konformer, Auslenkungswinkel, Röntgenkristallographie, Intermediatanalyse, Circulardichroismus, AHAS-ähnliche Reaktion-
local.subject.keywordstransketolase A, Escherichia coli, covalent intermediates, ThDP (thiamine diphosphate), near attack conformer, out-of-plane distortion, x-ray crystallography, analysis of covalent intermediates, circular dichroism, AHAS-like reactioneng
local.openaccesstrue-
dc.identifier.ppn587187875-
local.accessrights.dnbfree-
Appears in Collections:Hochschulschriften bis zum 31.03.2009

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