Physikochemische Charakterisierung des Bindungsverhaltens des Histidin- und Prolinreichen Glykoproteins

Abstract

Im Rahmen dieser Dissertation wurde das Bindungsverhalten des Histidin- und Prolinreichen Glykoproteins (HPRG) mit verschiedenen Liganden spektroskopisch untersucht. Im ersten Teil der Arbeit wurde dazu eine Aufreinigungsmethode etabliert, welche das Protein aus Kaninchenserum mit Hilfe einer Affinitäts- und einer Kationenaustauschchromatographie isolierte. Anschließend konnte EPR-spektroskopisch die Bindung mit nitroxidbasierten Liganden erfolgen. Weiterhin wurde Kupfer(II) genutzt, um daraus einen Einblick in die Koordinationssphäre und die bindenden Aminosäuren zu erhalten. Diese Messungen wurden sowohl unter verschiedenen Bedingungen, wie pH-Wert oder Stöchiometrie, als auch im Vergleich mit ausgewählten Peptidstrukturen des Proteins durchgeführt. Ebenfalls wurde in der Arbeit gezeigt, dass es möglich ist, die Selbstoxidation des Proteins EPR-spektroskopisch zu verfolgen. Durch gezielte qualitative Reaktionsbedingungen konnte die Oxidation des Proteins näher charakterisiert werden.

In this dissertation, the binding behavior of the histidine- and proline-rich glycoprotein (HPRG) with different ligands was investigated spectroscopically. In the first part of the thesis, a purification method was established for this purpose, which isolated the protein from rabbit serum using affinity and cation exchange chromatography. Subsequently, EPR spectroscopic binding with nitroxide-based ligands could be performed. Furthermore, copper(II) was used to gain insight into the coordination sphere and the binding amino acids from this. These measurements were performed under different conditions, such as pH or stoichiometry, as well as in comparison with selected peptide structures of the protein. Additionally, it is shown in the thesis that it is possible to follow the self-oxidation of the protein EPR spectroscopically. By using specific qualitative reaction conditions, the oxidation of the protein could be characterized in more detail.