Die Regulation der Proteinbiosynthese von Plakophilin 1 durch microRNAs

Abstract

Ziel dieser experimentellen Arbeit war es, die Regulation von PKP1 zu untersuchen, mit Hauptaugenmerk auf der posttranskriptionellen Regulation durch microRNAs (miRNAs). Diese kleinen, einzelsträngigen RNAs sind als Feinregulatoren der Proteinbiosynthese bekannt, indem sie mit der 3’UTR von mRNAs interagieren. Im Modellsystem der Mauskeratinozyten wurde mittels miR-TRAP eine spezifische Anreicherung der miRNAs let-7b und 34a über die 3’UTR von PKP1 detektiert. Im Luciferase-Assay führte eine Überexpression der miRNAs jeweils zur Reduktion und eine Repression jeweils zur Erhöhung der Expression der 3’UTR von PKP1. Für die 34a, jedoch nicht für die let-7b, konnte zusätzlich mittels Western Blot ein Effekt auf Proteinebene erzielt werden. Anhand der vorliegenden Ergebnisse ist anzunehmen, dass PKP1 posttranskriptionell durch die miRNAs 34a und let-7b reguliert werden kann, welche beide als Tumorsuppressoren bekannt sind. Demnach käme ihnen eine Bedeutung für die Regulation des zytoplasmatischen Pools von PKP1 zu, indem sie die Proliferation der Zelle verringern und somit gegen eine potentielle Tumorgenese wirken.

The aim of this work was the analysis of regulatory mechanism of PKP1, especially the post-transcriptional control through microRNAs (miRNAs). These small, single-stranded RNAs interact with the 3’UTR of mRNAs and are known as fine-regulators of the protein-biosynthesis. In mouse keratinocytes we could show via miR-TRAP a specific binding of the miRNAs let-7b and 34a at the 3’UTR of murine PKP1. Afterwards we detect a decreased expression of PKP1 after overexpression of these miRNAs in a luciferase assay while a repression of these miRNAs leads to an increased expression of PKP1. Western Blot studies also show an effect after overexpression and repression of the 34a but not for the let-7b. These findings suggest a post-transcriptional control of PKP1 through the miRNAs 34a and let-7b. Bothe miRNAa are known as tumorsuppressive miRNAs. Therefore, they have an importance in the regulation of the cytoplasmatic pool of PKP1 by decreasing the proliferation and acting against carcinogenesis.