Charakterisierung der c-Src Interaktions- und Aktivierungsdomäne in hnRNP K

Abstract

Die Proteintyrosinkinase c-Src wird durch zwei intramolekulare Interaktionen reguliert. Die enzymatisch inaktive Konformation wird durch die Interaktion der SH2-Domäne mit dem phosphorylierten C-terminalen Ende und durch die Interaktion der SH3-Domäne mit einer TypII Polyproline-Helix der Linkerregion zwischen der SH2- und der Kinasedomäne stabilisiert. HnRNP K, in dem erstmalig die KH-Domänen der KH-Domänenproteine beschrieben wurden, ist an der Regulation der Chromatinumgestaltung, der Transkriptions- und Translationsregulation bestimmter mRNAs und an weiteren verschiedenen Signalwegen beteiligt. Insbesondere fungiert hnRNP K als spezifischer Aktivator und als Substrat der Tyrosinkinase c-Src. In dieser Arbeit wurde untersucht, wie hnRNP K mit c-Src interagiert und wie c-Src durch hnRNP K aktiviert wird. Wir identifizierten die Prolinreste in den Prolinreichen-Motiven P2(aa285-297) und P3(aa303-318) in hnRNP K, die notwendig und hinreichend für die spezifische Aktivierung von c-Src sind und isolierten eine Aminosäuresequenz (aa216-226) in hnRNP K, die eine zweite Interaktion mit c-Src vermittelt. Unsere Untersuchungen zeigen, dass die Interaktion mit c-Src und die Aktivierung der Kinase zwei separate Funktionen von hnRNP K sind. HnRNP K fungiert als Mediatorprotein, dass in Signalkaskaden die Vermittlung zwischen Kinasen und Faktoren der Nukleinsäureprozessierung erleichtert.