Affilin® binding proteins selected against a class B GPCR ectodomain

Abstract

Diese Arbeit behandelt die effiziente Selektion und anschließende Charakterisierung von Affilin® Bindeproteinen die spezifisch die N-terminale Domäne des humanen pituitären Adenylatzyklase aktivierenden Polypeptid Typ I Rezeptors (nPAC1-Rs) binden. Die entsprechende Affilin®-Bibliothek, basierend auf einem dimeren Ubiquitin-Molekül in dem 15 Oberflächen-exponierte Aminosäurereste randomisiert wurden, wurde unter Verwendung des TAT-vermittelten phage displays gegen nPAC1-Rs selektiert. Die Bestimmung der Bindungsaffinität und –spezifität mittels ELISA und SPR, als auch Expressionsrate, Löslichkeit und die Thermostabilität ausgewählter Varianten, versprach ein durchaus hohes Potential für den Einsatz in der Strukturbestimmung von Proteinen. Die besten Kandidaten mit Bindungsaffinitäten gegen nPAC1-Rs im niedrig nanomolaren bis hoch picomolaren Bereich können somit zur Ko-Kristallisierung von nPAC1-Rs und dem Volllängen-Rezeptor PAC1-Rs eingesetzt werden.