Molekularbiologische Untersuchungen zur Bedeutung von Kallikreinen und Serinproteinase-Inhibitoren für die Entstehung von Hautkrankheiten und Allergien

Abstract

Die humanen Gewebekallikreine üben wichtige regulatorische Funktionen bei den Prozessen der Hautabschilferung aus. Das humane Kallikreine 11 (hK11) wird zwar stark in der Haut exprimiert, über die physiologische, wie auch pathologische Bedeutung dieser Proteinase ist bisher jedoch wenig bekannt. In dieser Arbeit wurde hK11 kloniert, in der Hefe Pichia methanolica sowie in CHO-Zellen sekretorisch exprimiert und in Aktivitätsstudien zur Bestimmung der kinetischen Parameter eingesetzt. Zudem konnte erstmals die Aktivitätshemmung von rekombinantem hK11 durch Domänen des Serinproteinase-Inhibitors LEKTI nachgewiesen werden. Für die Domänen 6 und 9 wurde eine deutliche Hemmung der Aktivität festgestellt, während andere untersuchte Domänen kaum einen Einfluss auf die hK11-Aktivität hatten. Für die LEKTI-Domäne 6 wurde der Ki-Wert ermittelt und die Ergebnisse weisen darauf hin, dass LD6 als gemischt nicht-kompetitiver Inhibitor gegenüber hK11 wirkt.

The human tissue Kallikreins fulfill important regulatory functions in desquamation of epidermal skin layers. Kallikrein 11 (hK11) is strongly expressed in the skin, however the physiological and pathological effect of this protease are rather unclear. In this work hK11 was cloned, brought to secretion in the yeast Pichia methanolica as well as in CHO-cells and applied in activity studies to the determination of kinetic parameters. Moreover, for the first time the inhibitory activities of domains of the serinprotease inhibitor LEKTI on recombinant hK11 has been demonstrated. Domains 6 and 9 exhibited a significant inhibitory effect on hK11 activity. However, other tested domains showed hardly any effect. For LEKTI domain (LD) 6 the Ki-value was determined and the results indicated that LD6 is a mixed noncompetitive inhibitor of hK11.