Entwicklung von Kluyveromyces lactis-basierten Vakzinen gegen Infektiöse Bursitis und Influenza

Abstract

Diese Arbeit beinhaltet die Entwicklung eines neuartigen Impfstoffes auf der Basis von Kluyveromyces lactis, der erfolgreich für die Immunisierung von Hühnern eingesetzt wurde. Dazu wurde das Gen VP2 des Virus der Infektiösen Bursitis (IBDV) bzw. Influenza-Hämagglutinin in den LAC4-Lokus von K. lactis genomisch integriert und die Expression durch GAL4-Überexpression und Sequenzanpassungen optimiert. Die Virus-Proteine wurden in der Zelle lokalisiert und biochemisch charakterisiert. Orale und subkutane Vakzinierungsstudien mit Mäusen und ganzen Hefezellen gegen Influenza zeigten keine nachweisbare Immunantwort. Allerdings konnten nach Immunisierungsversuchen mit Mäusen und VP2-Hefe Virus-neutralisierenden Antikörper gegen IBDV detektiert werden. Studien mit Hühnern und VP2-Hefe zeigten außerdem, dass es nicht nur zur Induktion Virus-neutralisierender Antikörper gegen IBDV kam, sondern dass eine Immunisierung auch wirksamen vor einer Infektion mit dem Virus schützte.

This work describes the development of a new Kluyveromyces lactis based vaccine, which has been successfully applied for immunization of chickens. For this purpose the VP2 gene of infectious bursal disease virus (IBDV) and influenza hemagglutinin were inserted into the genomic LAC4 locus of K. lactis and the expression was increased by GAL4 overexpression and sequence optimization. The virus proteins were localized intracellularly and were characterized biochemically. Oral and subcutaneous vaccination studies with mice and complete yeast cells against influenza showed no detectable immune response. In contrast, immunization studies with mice and VP2 containing yeast resulted in virus neutralizing antibodies against IBDV. Moreover, studies with chickens showed not only an induction of virus neutralizing antibodies but also that the vaccinated chickens are protected against a virus challenge.