Untersuchungen zur Ursache der Anreicherung des AXL-Proteins durch den AXL-Inhibitor BMS-777607

Abstract

Für die Rezeptortyrosinkinase AXL wurde ein Einfluss auf Apoptose, Proliferation, Migration und Resistenz gegen Chemotherapeutika in Krebszellen beschrieben. Mehrere AXL-Inhibitoren wurden entwickelt, darunter BMS777607. Durch Behandlung von Krebszellen mit BMS777607 kam es zu einer Anreicherung der AXL-RTK. Diese Anreicherung habe ich mittels Western Blot und Durchflusszytometrie nachvollzogen und den Mechanismus untersucht. Auf Ebene der AXL-mRNA, Translation, Glykosylierung und der Ektodomänen-Abspaltung konnte keine signifikante Veränderung festgestellt werden. Eine signifikante Hemmung des lysosomalen Abbaus durch verminderte Ubiquitinierung und reduzierte Internalisierung war erkennbar. Mittels kinaseinaktiver AXL-Mutante (K567R) konnte zudem die Notwendigkeit der Aktivität der Kinase gezeigt werden. Den verminderten lyososomalen Abbau erachte ich als ursächlich für die Anreicherung. Dies sollte bei der zukünftigen Entwicklung zielgerichteter Therapeutika berücksichtigt werden.

The receptor tyrosine kinase AXL was shown to be assiciated with apoptosis, proliferation, migration and resistence to chemotherapie in cancer cells. Several AXL inhibitor have been developed, including BMS777607. After treatmend of cancer cells with BMS777607 an accumulation of AXL-RTK was observed. This accumulation was reproduced using western blot and flow cytometry and the mechanism was enlightened. Regarding the amount of AXL-mRNA, translation, glycosylation and receptor shedding no significant difference was observed due to AXL inhibition. A significant reduction in lysosomal degradation caused by inhibited ubiquitination and internalization was detected. The activity of the kinase domain of AXL was shown to be necessary for accumulation, tested with the kinase dead mutant AXL (K567R). In conclusion i consider the reduced lyososomal degradation to cause the accumulation. This should be taken into account in the further developent of targeted therapeutics.