Establishment of a plant-based system for identifying phytoeffectors and analysis of phytoeffector targets under abiotic stress in Arabidopsis

Abstract

Phytoeffektoren bieten einen vielversprechenden Ansatz, die pflanzeneigene Abwehr bei abiotischem Stress zu unterstützen. Zu ihrer Identifizierung wurde ein Assay basierend auf der Aktivierung von Resistenzmechanismen auf transkriptioneller Ebene entwickelt. Arabidopsis RD29A-LUC-Reporterpflanzen wurden abiotischen Stimuli in Kombination mit Testsubstanzen ausgesetzt, welche die transkriptionelle Stressantwort potentiell erhöhen könnten. Diese wurden in silico designt, an Poly(ADP-Ribose)-Polymerasen (PARPs) zu binden. PARPs sind an der DNAReparatur beteiligte Zellkernenzyme, die posttranslational ADP-Ribose-Moleküle auf Kernproteine übertragen. Arabidopsis besitzt 3 PARP-Gene. Einzel-, Doppel- und Dreifach-parp-Mutanten zeigten unterschiedliche Verhaltensweisen gegenüber abiotischem Stress, während eine pharmakologische PARP-Hemmung die pflanzliche Reaktion konsistenter beeinflusste. Dies spricht für eine ungleiche funktionale Redundanz und/oder zusätzliche Zielproteine.

Phytoeffectors offer a promising approach to support the plant's own defense mechanisms against abiotic stress. For their identification an assay based on the activation of resistance mechanisms at the transcriptional level was established. Arabidopsis RD29A-LUC reporter plants were treated with abiotic stressors in combination with test substances potentially able to increase a transcriptional stress response. Those substances had been in silico-designed to target poly(ADP-ribose) polymerases (PARPs). PARPs are nuclear enzymes involved in DNA damage repair by conferring posttranslational addition of ADP-ribose to nuclear proteins. Arabidopsis harbors 3 PARP genes. In the present work, parp single, double, and triple mutants showed different behavior to abiotic stresses, while pharmacological PARP inhibition led to a more consistent result, indicating the existence of unequal functional redundancy and/or additional target proteins of PARP inhibitors.