Functional characterization of Effector of Transcription (ET) in Arabidopsis thaliana

Abstract

Effector of Transcription (ET)-Faktoren sind durch hoch konservierte C-terminale DNA- und Zink- bindende, nur bei Pflanzen gefundene, repetitive Protein-Domänen charakterisiert. Zusätzlich besitzen sie eine Domäne mit struktureller Ähnlichkeit zu einer DNA-Einzelstrang schneidenden Domäne (GIY-YIG) prokaryontischer Reparaturproteine. Für eine funktionelle Charakterisierung von ET wurden drei experimentelle Ansätze angewandt: a) Synthese von ET-Faktoren in Bakterien und die Erzeugung spezifischer Antikörper (nanobodies), b) die biochemische Analyse der DNA-Bindungsaktivität sowie die in vivo Untersuchung zur Funktion einer DNA-Einzelstrang schneidenden Proteindomäne und c) die genetische Charakterisierung der ET-Genfamilie auf der Basis von T-DNA-Mutanten und RNAi-Konstruktionen. Die beschriebenen Ergebnisse charakterisieren ET-Faktoren als neue, redundant funktionierende Transkriptionsfaktoren mit DNA-Einzelstrang-schneidender Aktivität. Mutantenanalyse belegt darüber hinaus wichtige Funktionen während der Entwicklung des männlichen Gametophyten sowie der frühen Embryogenese und Endosperm-Entwicklung.