Untersuchungen zur Funktion zellulärer RNA-Bindeproteine in der RNA-Replikation des West-Nil-Virus

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurde das RNA-Bindeprotein AUF1 als ein neuer Wirtsfaktor der RNA-Replikation des humanpathogenen West-Nil-Virus (WNV) identifiziert. Die Depletion des endogenen AUF1 durch RNA-Interferenz reduziert die Replikation eines WNV-Replikons und führt zu einer verzögerten Vermehrung eines infektiösen WNV. AUF1-Isoform p45 fördert die WNV in vitro (-)-Strang-RNA-Synthese. Es konnte eine posttranslationale Modifikation von AUF1p45 in Form einer Dimethylierung identifiziert werden. Die methylierte Variante von AUF1p45 ist im Vergleich zum nicht-methylierten AUF1p45 effizienter die WNV in vitro (-)-Strang-RNA-Synthese zu stimulieren. Es konnte gezeigt werden, dass AUF1p45 eine RNA-Chaperone-Aktivität besitzt, die zu einer verstärkten Interaktion der 5'- und der 3'-terminalen Enden der WNV-RNA beiträgt. Damit wurde eine Beteiligung von AUF1p45 an der Genomzyklisierung der WNV-RNA nachgewiesen, die für eine Replikation der viralen RNA essentiell ist.

This study identified the RNA binding protein AUF1 as a new host factor that is important for RNA replication of the human pathogen West Nile virus (WNV). RNAi-mediated depletion of AUF1 significantly decreases RNA replication of a WNV Replicon and delays proliferation of infectious WNV. AUF1 isoform p45 supports WNV in vitro negative-strand RNA synthesis. AUF1p45 was found to be posttranslationally modified by arginine methylation. The methylated variant of AUF1p45 stimulates WNV in vitro negative-strand RNA synthesis more efficiently than the non-methylated AUF1p45. It was demonstrated that AUF1p45 has an RNA chaperone activity that triggers 5'-3' interactions of the WNV RNA. Hence, AUF1p45 is involved in genome cyclization of the WNV RNA that is essential for efficient viral RNA replication.