Generierung und Charakterisierung spezifischer monoklonaler und polyklonaler Antikörper gegen humanes Cathepsin F

Abstract

Cathepsin F (CF) ist ein lysosomales, proteolytisches Enzym der Papain-Familie der Cystein-Proteasen. Die Funktionen von CF sind, u.a. aufgrund des Fehlens spezifischer Antikörper, weitgehend ungeklärt. Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurden mono-(mAK) und polyklonale Antikörper (pAK) gegen rekombinantes humanes CF aus E. coli undCF-spezifische Peptide generiert und charakterisiert (via ELISA, Immunoblot, Epitopkartierung). Die spezifischen und kreuzreaktivitätsfreien mAK CF77-3C2, CF77-4D1 und CF169-6H12 und pAK („Franzi“, „Fritzi“) wurden in der Immunhistochemie eingesetzt. Mit ihnen konnte CF in der Kolonmukosa, im Herz- (Kardiomyozyten) und Lebergewebe (Hepatozyten, Gallengangepithel) spezifisch nachgewiesen werden. Als Kontrolle diente CF-negatives Thymusgewebe. Zur Klärung gewebsspezifischer Funktionen von CF sind weiterführende Untersuchungen, z. B. mittels der gewonnenen spezifischen AK, erforderlich.

Cathepsin F (CF) is a lysosomal cysteine protease of the papain superfamily. Little is known about the functions of CF, partly due to a lack of specific anti-CF antibodies. The objectives of this doctoral thesis were to generate monoclonal (mAB) and polyclonal antibodies (pAB) against human recombinant CF of E. coli and against specific CF-peptides, and to characterize these antibodies via ELISA, immunoblotting and epitope mapping. Specific mAB (CF77-3C2, CF77-4D1, CF169-6H12) and pAB („Franzi“, „Fritzi“) that had not shown any antibody cross reactivities were applied in immunohistochemistry. With these antibodies CF was specifically detected in colon mucosa, heart (cardiomyocytes) and liver tissue (hepatocytes, biliary duct epithelium). Thymus tissue served as the negative control. Further studies are required to determine tissue-related specific functions of CF, for which these specific antibodies could be used.