Skip navigation
Please use this identifier to cite or link to this item: http://dx.doi.org/10.25673/1490
Title: Selektion, Maturierung und strukturelle Charakterisierung von auf einem dimeren Ubiquitin-scaffold basierenden anti-ED-B Bindeproteinen und deren Fusion mit Interleukin-2
Author(s): Katzschmann, Anja
Referee(s): Pietzsch, Markus, Prof. Dr.
Stubbs, Milton, Prof. Dr.
Syldatk, Christoph, Prof. Dr.
Granting Institution: Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg
Issue Date: 2015
Extent: Online-Ressource (139 Bl. = 4,40 mb)
Type: Hochschulschrift
Type: Doctoral Thesis
Exam Date: 17.02.2015
Language: German
Publisher: Universitäts- und Landesbibliothek Sachsen-Anhalt
URN: urn:nbn:de:gbv:3:4-14726
Subjects: Antikörper
Skleroproteine
Ubiquitin
Bindeproteine
Interleukin 2
Fibronectin
Online-Publikation
Hochschulschrift
Abstract: Künstliche, scaffold-basierte Bindeproteine stellen für Therapie und Diagnostik eine Alternative zu Antikörpern dar. Auf der Oberfläche eines Ubiquitin-Dimers wurden Aminosäurepositionen für eine Randomisierung ausgewählt und eine entsprechende cDNA-Bibliothek konstruiert. In dieser Arbeit wurden daraus mittels phage display Bindeproteine gegen die Extradomäne-B (ED-B) des onkofetalen Fibronektins isoliert. Durch eine Maturierung mittels error-prone PCR wurden hoch affine und spezifische Bindeproteine generiert. Ausgewählte Bindeproteine wurden mit Interleukin-2 fusioniert, wobei die Affinität und die biologische Aktivität beider Komponenten erhalten blieb. Durch eine Röntgenstrukturanalyse von Bindeproteinen allein und in Komplex mit dem Targetprotein ED-B konnten die an der Bindung beteiligten Aminosäurereste identifiziert werden. Trotz der Vielzahl an ausgetauschten Aminosäureresten blieb in den Bindeproteinen die Ubiquitin-typische Struktur erhalten.
Artificial, scaffold-based binding proteins were developed as alternatives to antibodies for therapeutic and diagnostic use. Several surface exposed amino acid residues were chosen for randomization and a corresponding cDNA library was constructed. In this work, binding proteins against the extra-domain B (ED-B) of the oncofetal fibronectin were selected via phage display . By maturation via error-prone PCR highly specific binding proteins were generated. Genetic fusions of interleukin-2 and several binding proteins were produced. Both fusion partners retained affinity and biological activity. Binding proteins were analyzed by X-ray crystallography, individually and in complex with the target protein ED-B. Thus the binding mode and the amino acid residues involved in the interaction were identified. Despite numerous amino acid exchanges the typical ubiquitin fold was preserved.
URI: https://opendata.uni-halle.de//handle/1981185920/8261
http://dx.doi.org/10.25673/1490
Open Access: Open access publication
Appears in Collections:Medizin und Gesundheit

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
20141027 Diss Katzschmann final für Bibo.pdf4.51 MBAdobe PDFThumbnail
View/Open
Show full item record BibTeX EndNote


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.