Epigenetische Veränderungen am Promotor des Fragilen Histidin Trias (FHIT)-Gens in menschlichen Sebozyten unter dem Einfluss der in-vitro Kultur

Abstract

Hintergrund: Fehlt die Tumorsuppressor-Funktion des FHIT-Genprodukts, so können Talgdrüsenkarzinome entstehen. Zielstellung: Am Modell der Sebozytenlinie SZ95 sollten methylierte CpGs am 5´-Ende des FHIT-Gens identifiziert, die Abnahme der Genexpression und die Zunahme von DNA-dsBrüchen untersucht werden. Methoden: Methylierungs-, Immunfluoreszenz-Analysen, Promotorsequenzierung sowie Behandlung der SZ95-Zellen mit 5-Azacytidin/TSA. Ergebnisse: Die Kultivierung verlief mit einer zunehmenden Methylierung der CpGs, einer Abnahme der FHIT-Genexpression sowie Anhäufung von dsBrüchen. Die Behandlung mit 5-Azacytidin/TSA zeigte eine Abnahme der DNA-Methylierung sowie Re-Expression von FHIT-Transkripten.Schlussfolgerungen: Durch in-vitro Zellkultur können epigenetische Veränderungen im zellulären Genom hervorgerufen werden.

Background: Due to the lack of tumorsuppressor-function of the FHIT-gene product, sebaceous carcinomas can develop. Objektives: The model of the sebocyte cell linie SZ95 was used to identify methylated CpGs at the 5´-end of the FHIT-Gene, also the decrease of gene expression and the increase of DNA-ds-breaks should be examined. Methods: Methylation-, Immunfluorescence-analysis, promotor sequencing and treatment of SZ95-cells with 5-azacytidine/TSA. Results: The cultivation was accompanied by an increasing methylation of the CpGs, a decrease of the FHIT-gene expression and an accumulation of ds-breaks. Treatment with 5-Azacytidine/TSA showed a decrease in DNA methylation and a re-expression of FHIT-transcripts. Conclusions: Epigenetic changes in the cellular genome can be caused by in-vitro cell culture.