Biochemie und Protein-Protein-Interaktionen des Multidomänen-Cyclophilins Cyp58

Abstract

Das humane Cyp58 (Cyp-60) ist ein Multidomänen-Cyclophilin, das aus einer N-terminalen U-Box- und einer C-terminalen Peptidyl-Prolyl-cis/trans-Isomerase (PPIase)-Domäne besteht. Das Ziel dieser Arbeit war eine biochemische Charakterisierung von Cyp58 sowie die Identifizierung von physiologischen Interaktionspartnern des Proteins. In der vorliegenden Arbeit wurde Cyp58 rekombinant aus E. coli gewonnen. Es wurde gezeigt, dass Cyp58 eine aktive PPIase und eine aktive Ubiquitin-Protein-Ligase ist. Beide funktionale Domänen arbeiteten unabhängig und beeinflussten sich nicht gegenseitig. In Interphase-HeLa-Zellen zeigte Cyp58 eine diffuse Lokalisation im Zellkern mit Ausnahme der Nucleoli. Während der Metaphase kolokalisierte Cyp58 mit den Centrosomen und dem -Tubulin des Spindelapparats, während der frühen Cytokinese lokalisierte Cyp58 am Midbody. Durch Pulldown/MS-Experimente wurden 14-3-3-Proteine und SET-Protein als Interaktionspartner von Cyp58 in HeLa-Zelllysat identifiziert. Zwischen Cyp58 und den Interaktionspartnern konnte keine gegenseitige Beeinflussung festgestellt werden. Cyp58 und SET-Protein zeigten aber eine Kolokalisation an den Centrosomen während der Metaphase.

The human Cyp58 (Cyp-60) is a multi-domain cyclophilin consisting of an N-terminal U-box and a C-terminal peptidyl prolyl cis/trans isomerase (PPIase) domain. The aim of this work was a biochemical characterization of Cyp58 and the identification of physiological interaction partners of the protein. In the present work Cyp58 was recombinantly produced in E. coli. It was shown that Cyp58 is an active PPIase and an active ubiquitin protein ligase. Both functional domains worked independently and did not affect each other. In interphase HeLa cells Cyp58 showed a diffuse localization in the nucleus with exclusion of the nucleoli. During the metaphase Cyp58 colocalized with the centrosomes and the -tubulin of the spindle apparatus, during the early cytokinesis Cyp58 localized at the midbody. By application of pull-down/MS experiments, 14-3-3 proteins and SET protein were identified as interaction partners of Cyp58 in HeLa cell lysate. Between Cyp58 and the interaction partners no mutual influence could be detected. However, Cyp58 and SET protein showed a colocalization at the centrosomes during the metaphase.